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細胞培養常見問題解答

發佈時間:2019-05-15 13:19:45 點擊次數:

Q:培養基 pH 值異常

A:

• 二氧化碳分壓設置錯誤:根據培養基中碳酸氫鈉的濃度而增加或降低培養箱中二氧化碳分壓。

• 培養箱無二氧化碳:定期觀察二氧化碳壓力錶,及時更換二氧化碳鋼瓶。

• 細胞培養瓶蓋擰得過緊:將蓋子旋鬆 1/4 圈,或換成透氣蓋培養瓶。

• 細菌、真菌污染 丟棄細胞和培養基。

• 培養基中的平衡鹽不匹配:二氧化碳平衡環境中使用以 Earle's 平衡鹽爲基礎的培養基,大氣條件下使用以Hank's 平衡盐为基础的培养基。

• 碳酸氫鹽緩衝系統緩衝能力不足:加入 HEPES 緩衝液,使其終濃度爲 10-25 mM。


Q:細胞生長緩慢

A:

• 培養基或血清改變:比較不同培養基中葡萄糖、氨基酸等成分有無差異;增加細胞接種密度;更換新鮮培養基。

• 必需生長促進成分 ( 如 L- 谷氨醯胺或生長因子 ) 缺乏、耗盡或降解使用新鮮培養基或向現有培養基中添加必需成分。

• 細胞初始接種密度過低:增大細胞接種密度。

• 支原體污染:檢測培養物有無支原體污染,如果被污染,則棄之,或用支原體清除試劑進行清除。

• 細胞代次過高:取用新的細胞。

• 輕度細菌或真菌污染:在添加抗生素的培養基中培養細胞,如果培養物被污染,則棄之。

試劑儲存不當血清應置於-5℃至 -20℃下儲存 ;培養基應置於 2-8℃下避光儲存;完全培養基應置於2-8℃下避光儲存,並限在2周內使用。


Q:細胞死亡

A:

• 胰酶消化過度:縮短胰酶消化時間或降低消化用胰酶的工作濃度。

• 細胞狀態差:取用新的細胞。

• 支原體污染:檢測培養物有無支原體污染,如果被污染,則棄之,或用支原體清除試劑進行清除。

• 培養基中無附着因子:如採用無血清培養方法,應確保其含有附着因子,或使用包被過的培養器皿。

• 培養箱中無二氧化碳:定期觀察二氧化碳壓力錶,及時更換二氧化碳鋼瓶。

• 培養箱溫度有波動:監測培養箱內溫度。

• 轉染試劑毒性過強,細胞代次過高,質粒純度差使用低毒性的轉染試劑或在轉染後及時換液;使用低代次細胞轉染 ;使用高品質的質粒轉染。

• 細胞解凍或凍存過程中損傷大:取用新的細胞。

• 培養基的滲透壓不正確:檢查完全培養基的滲透壓。大多數哺乳動物細胞可耐受的滲透壓爲 260-350 mOsmol/kg,昆蟲細胞可耐受的滲透壓爲 340-380 mOsmol/kg。

• 培養基中有毒代謝產物蓄積過多:更換新鮮培養基。


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