產品FAQ

基因組DNA純化常見問題解答

發佈時間:2019-05-15 11:48:19 點擊次數:

Q:DNA 產量低

A:

• 裂解不充分:減少起始材料的用量。檢查樣品中是否加入了 Proteinase K溶液。如果提取的材料爲動物組織,儘量將組織切碎,並要保證材料完全浸泡在裂解液中。適當延長裂解時間。

• 提取材料質量不好:儘量選用新鮮材料,樣品採集後應儘快保存在 -70℃或液氮中。DNA 的產量取決於材料的種類和幼嫩程度。

• 離心柱堵塞:過柱前檢查裂解液是否清亮,去除溶液中過於粘稠的不溶物。

• 洗滌溶液中未添加無水乙醇。必須在洗滌溶液中添加合適比例的無水乙醇。

• 洗脫條件不合適:洗脫液 EB 或超純水最好預先加熱至 70℃,用超純水洗脫前應檢查其pH 值是否在 7.0-8.5 之間,如 pH 值小於 7 將明顯影響洗脫效率,需調節後再進行洗脫。洗脫液應儘量加到離心柱的中央,在離心前室溫靜置 1 分鐘。

• DNA 斷裂或降解:避免因移液槍反覆吹吸或反覆凍融樣品造成的 DNA 損傷。避免在操作過程中帶入外源 DNase 污染。


Q:洗脫液顏色發黑或硅膠膜脫色 ( 動物組織或鼠尾材料 )

A:來源於組織的色素大量結合在離心柱上並與 DNA 一併洗脫:在過柱前檢查是否已加入乙醇,乙醇可防止色素與硅膠膜結合。在裂解液結合步驟可適當加大轉速和延長離心時間。

• RNA 污染:可在樣品材料製備過程中添加適量的 RNase A 降解 RNA。


Q:影響下游的酶切

A:

• 純化的 DNA 中有乙醇殘留:在洗滌步驟中可能會帶來乙醇的殘留。加入洗脫液之前將離心柱在最大轉速下離心 2-3 分鐘徹底乾燥離心柱。

• 純化的 DNA 中有鹽分殘留:採用正確的洗滌操作步驟,用不同 CB 溶液洗滌後再用 WB 洗滌。


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