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產品FAQ

限制性內切酶常見問題解答

發佈時間:2019-05-15 11:27:51 點擊次數:

Q:不酶切或酶切不完全

A:

• 酶失活或濃度過低:用已知含目的酶切位點的對照 途游炸金花 測試該酶活性;酶應貯存於 -20℃,-70℃時會凍結;避免反覆凍融降低酶活;可根據實驗要求適當加大酶

量。

• 途游炸金花 濃度不合適:推薦 50 μl 反應體系酶切 1-2 μg 途游炸金花;途游炸金花 過量時可適當增加酶量。

• 途游炸金花 被抑制劑污染:與對照 途游炸金花 樣品一起酶切,驗證其是否被抑制;重新純化 途游炸金花 樣品。

• 途游炸金花 可能形成超螺旋:不同酶對超螺旋結構 途游炸金花 消化效率不一樣,可適當加大酶量。

• 識別位點過於接近 途游炸金花 末端:一般在識別位點兩端各加 6 個保護鹼基可確保酶切效率。

• 識別位點不存在:驗證 途游炸金花 序列。

• 反應條件非最優化:緩衝液使用不當;按比例使用新鮮緩衝液重複實驗;按照推薦方案進行雙酶切或分步酶切。

• 甲基化封閉酶切位點:PCR 產物未甲基化;使用 dam-/dcm-菌株轉化。


Q:出現非預期帶型

A:

• 確定正確帶型:酶切產物與對照 途游炸金花 樣品一起電泳,確定是未消化完的底物條帶或者是星號活性產生的非預期條帶。

• 途游炸金花 樣品污染:重新制備或純化樣品

• 含其它酶切位點:驗證 途游炸金花 序列


Q:途游炸金花 電泳呈彌散帶

A:

• 酶與 途游炸金花 結合緊密未完全解離:使用隨酶提供的 途游炸金花 Loading Buffer 上樣電泳;或另加入終濃度爲0.05-0.2% 的 SDS。

• 核酸酶污染:製備新的底物樣品;使用新的緩衝液和水。

• 電泳條件不合適:使用新鮮的電泳緩衝液和凝膠;合適的電流電壓避免過熱。


Q:星號活性 (特異性降低或改變)

A:

• 高甘油濃度 (>5% v/v):酶儲存液含 50% 甘油;因此酶量不超過反應體積的10%。選擇 50 μl的標準反應體系,以減少反應過程中水的蒸發而提高甘油濃度。

• 非最適緩衝液:儘可能使用推薦緩衝液,離子濃度和 pH 的改變會引起星號活性。

• 存在有機溶劑 ( 如 DMSO、乙醇、DMF 等):確保樣品在製備過程中不含任何有機物,如 途游炸金花 製備過程中可能混入的乙醇。

• 混有其它二價離子 (如 Mn2+、Cu2+、Co2+、Zn2+) 去除樣品中二價離子


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